Kit de detección de ácido nucleico de Shigaella de Guangdong Huankai Biotech, muy popular (Método de sonda de fluorescencia por PCR) Fz00

Nombre del producto: Kit de detección de ácido nucleico de Shigella (método de sonda fluorescente de PCR)
Nombre en inglés:Kit de detección rápida de Shigella (ensayos con sonda fluorescente)

Número de producto y especificaciones del embalaje:

Introducción del producto:Este kit solo es apto para la detección cualitativa de Shigella en alimentos. Las demás pruebas deben realizarse de acuerdo con la norma nacional GB4789-2012, Norma Nacional de Seguridad Alimentaria, Inspección Microbiológica de Alimentos, Inspección de Shigella.

Principio de detecciónBasándose en la tecnología de PCR en tiempo real, se utilizan cebadores, sondas fluorescentes y otros reactivos necesarios para el gen específico de Shigella, y se añade la muestra a analizar para llevar a cabo la reacción de amplificación. Durante el proceso de amplificación, la sonda fluorescente se une al fragmento del gen diana, que puede ser descompuesto por la enzima Taq y producir una señal fluorescente. En este momento, el instrumento de PCR cuantitativa fluorescente puede reconocer la señal fluorescente y dibujar la curva de amplificación en tiempo real correspondiente basándose en sus cambios de intensidad, determinando así si se detecta Shigella.

Kit de detección de ácido nucleico de Shigella(Método de sonda fluorescente PCR) Componentes del producto:

Condiciones de almacenamiento y vida útil:Conservar a -20℃ protegido de la luz, válido durante 12 meses, evitar congelaciones y descongelaciones repetidas.

Sensibilidad:El límite mínimo de detección alcanza 100 UFC/Test

Otros materiales e instrumentos necesarios:Instrumento de PCR cuantitativa por fluorescencia (con canal de fluorescencia capaz de detectar marcadores FAM), centrífuga de alta velocidad, pipetas, puntas de pipeta y tubos de centrífuga, etc.

Kit de detección de ácido nucleico de ShigellaGuía del usuario (Método de sonda fluorescente PCR):

1. Pretratamiento de la muestra

1) Preparación de ADN plantilla para caldo de enriquecimiento de muestras:
a) Tomar 25 g de la muestra a ensayar y colocarla en 225 mL de caldo de enriquecimiento de Shigella e incubar a 36 ℃ ± 1 ℃ durante 10~12 h;
b) Tomar 1 mL de la solución de enriquecimiento anterior en un tubo de centrífuga estéril de 1,5 mL, centrifugar a 6000 rpm durante 5 minutos y retirar completamente el sobrenadante;
c) Añadir 30 μL de tampón de lisis para suspender completamente el precipitado en el fondo del tubo, golpear la pared del tubo para eliminar burbujas y calentar a 99 °C durante 10 min;
d) Centrifugar a 12000 rpm durante 15 min. El sobrenadante es la muestra de ADN que se analizará. Colocarla en hielo y centrifugar de nuevo si no se va a utilizar durante un tiempo prolongado.

2) Preparación de ADN molde a partir de colonias sospechosas:Seleccione colonias sospechosas y suspéndalas completamente en un tubo de centrífuga estéril previamente llenado con 30 μL de tampón de lisis, y luego siga los pasos c) y d) anteriores.

2. Añadir muestra y reaccionar.

1) Tome n tubos de reacción de PCR según sea necesario (n = 1 tubo de control negativo + número de muestras a analizar + 1 tubo de control positivo), saque la premezcla del kit, derrítala completamente, agítela en vórtex y centrifugue brevemente, agregue 20 μL de premezcla a cada tubo y reserve.
2) Añada 5 μL de control negativo, ADN de muestra y control positivo a los n tubos de reacción mencionados, respectivamente, para un volumen total de reacción de 25 μL. Cierre bien las tapas de los tubos, centrifugue brevemente y realice inmediatamente la reacción de amplificación por PCR.
3) El sistema de reacción PCR es de 25 μL y se utiliza el canal de detección FAM para recolectar la señal de fluorescencia a 60 °C en la etapa de reacción 2. El procedimiento específico es el siguiente:

Nota: Recopile la señal de fluorescencia a 60 ℃ en la etapa de reacción 2. Para el instrumento de PCR de fluorescencia multicanal, seleccione fluoresceína "FAM" como canal de recolección de señal, seleccione "Ninguno" para el grupo de extinción y seleccione "Ninguno" para la corrección del tinte.

3. Resultados:En general, los resultados de la prueba pueden leerse directamente a través de la línea base y el umbral definidos automáticamente por el software. Si se requieren ajustes, estos pueden realizarse según las condiciones propias del instrumento (como el ruido, etc.) y los diferentes canales de fluorescencia seleccionados.

1) Control de calidad:El control negativo no presenta una curva de amplificación de tipo S evidente ni un valor Ct > 35, mientras que el control positivo presenta una curva de amplificación de tipo S y un valor Ct < 30. Si los controles positivo y negativo no cumplen las condiciones mencionadas al mismo tiempo, los resultados de la prueba no son válidos y se debe volver a realizar la prueba o contactar con el soporte técnico del producto.

2) Interpretación de los resultados:(Interpretación basada en el valor Ct obtenido de la reacción, consulte la tabla a continuación para obtener más detalles:)