

La cromatografía es un método de separación y análisis, y la separación es el núcleo. Por lo tanto, la columna cromatográfica responsable de la separación es el corazón del sistema cromatográfico. Los requisitos para las columnas cromatográficas son alta eficiencia de columna, buena selectividad y alta velocidad de análisis. Diversos rellenos de partículas disponibles comercialmente para HPLC, como gel de sílice poroso y fases ligadas basadas en gel de sílice, alúmina, microesferas de polímeros orgánicos (incluyendo resinas de intercambio iónico), carbón poroso, etc., generalmente tienen un tamaño de partícula de 3, 5, 7, 10 μm, etc., y la eficiencia teórica de la columna puede alcanzar de 50.000 a 160.000/m. Para el análisis general, solo se requieren 5.000 números de plato de eficiencia de columna; para el análisis homólogo, solo se requieren 500. Para pares de sustancias más difíciles de separar, se pueden utilizar columnas de hasta 20.000, por lo que generalmente una longitud de columna de aproximadamente 10 a 30 cm puede satisfacer las necesidades de análisis de mezclas complejas.
Las columnas cromatográficas se pueden dividir en dos categorías: columnas empaquetadas y columnas de tubo abierto. La mayoría están hechas de metal o vidrio. Hay tubos rectos, serpentines, tubos en forma de U y otras formas. La cromatografía líquida suele utilizar columnas empaquetadas.
El efecto de separación de la columna cromatográfica depende de la fase estacionaria seleccionada, así como de las condiciones de preparación y operación de la columna cromatográfica.
La eficiencia de la columna se ve afectada por factores dentro y fuera de la columna. Para lograr una alta eficiencia de la columna cromatográfica, además del pequeño volumen muerto fuera de la columna, también se requieren una estructura de columna razonable (minimizando el volumen muerto fuera del lecho empaquetado tanto como sea posible) y tecnología de relleno. Incluso con la mejor tecnología de relleno, las condiciones de relleno en el centro de la columna y a lo largo de la pared del tubo siempre son diferentes. El área cercana a la pared del tubo es relativamente suelta, propensa al flujo canalizado y tiene una velocidad de flujo más rápida, lo que afecta la forma del flujo del eluyente y ensancha la banda espectral. Este es el efecto de pared del tubo. Esta área de la pared del tubo es aproximadamente 30 veces el espesor del diámetro de partícula desde la pared del tubo hacia el interior. En los sistemas generales de cromatografía líquida, la influencia del efecto extracolumna en la eficiencia de la columna es mucho mayor que el efecto de pared del tubo.
Guardar Operación
1. Si la fase móvil contiene ácido o sal inorgánica, debe enjuagarse primero con agua desionizada (20 veces el volumen de la columna). Luego use acetonitrilo o metanol para almacenar la columna cromatográfica. Selle la unión de la columna y almacénela en un ambiente estable.
2. Evite el impacto mecánico directo o la caída de la columna cromatográfica para evitar la degradación de su rendimiento.












