

A cromatografia é um método de separação e análise, e a separação é o núcleo. Portanto, a coluna cromatográfica responsável pela separação é o coração do sistema cromatográfico. Os requisitos para colunas cromatográficas são alta eficiência de coluna, boa seletividade e rápida velocidade de análise. Vários enchimentos particulados comercialmente disponíveis para HPLC, tais como sílica gel porosa e fases ligadas à base de sílica gel, alumina, microesferas de polímero orgânico (incluindo resinas de troca iônica), carbono poroso, etc., geralmente têm um tamanho de partícula de 3, 5, 7 , 10 μm, etc., e a eficiência teórica da coluna pode atingir 50.000 a 160.000/m. Para análise geral, são necessários apenas 5.000 números de placas de eficiência de coluna; para análise homóloga são necessários apenas 500; para pares de substâncias mais difíceis de separar, podem ser usadas colunas de até 20.000, de modo que geralmente um comprimento de coluna de cerca de 10 a 30 cm pode atender às necessidades de análise de misturas complexas.
As colunas cromatográficas podem ser divididas em duas categorias: colunas empacotadas e colunas de tubo aberto. A maioria é feita de metal ou vidro. Existem tubos retos, bobinas, tubos em forma de U e outros formatos. A cromatografia líquida geralmente usa colunas compactadas.
O efeito de separação da coluna cromatográfica depende da fase estacionária selecionada, bem como das condições de preparação e operação da coluna cromatográfica.
A eficiência da coluna é afetada por fatores dentro e fora da coluna. Para alcançar a alta eficiência da coluna cromatográfica, além do pequeno volume morto fora da coluna, também são necessárias uma estrutura de coluna razoável (minimizando ao máximo o volume morto fora do leito empacotado) e tecnologia de enchimento. Mesmo com a melhor tecnologia de enchimento, as condições de enchimento no centro da coluna e ao longo da parede do tubo são sempre diferentes. A área próxima à parede do tubo é relativamente solta, propensa ao fluxo do canal e tem uma vazão mais rápida, o que afeta o formato do fluxo do agente de lavagem e amplia a faixa do espectro. Este é o efeito da parede do tubo. A área da parede do tubo é cerca de 30 vezes a espessura do diâmetro da partícula desde a parede do tubo até o interior. Em sistemas gerais de cromatografia líquida, a influência do efeito extra-coluna na eficiência da coluna é muito maior do que o efeito da parede do tubo.
Salvar operação
1. Se a fase móvel contiver ácido ou sal inorgânico, ela deverá ser enxaguada primeiro com água deionizada (20 vezes o volume da coluna). Em seguida, use acetonitrila ou metanol para armazenar a coluna cromatográfica. Sele a junta da coluna e armazene-a em um ambiente estável.
2. Evite impacto mecânico direto ou queda da coluna cromatográfica para evitar degradação do seu desempenho.













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