Kit de detecção de ácido nucléico Shigaella da Guangdong Huankai Biotech mais vendido (Método de sonda de PCR-fluorescência) Fz00

Nome do produto: Kit de detecção de ácido nucleico Shigella (método de sonda fluorescente de PCR)
Nome inglês:Kit de detecção rápida para Shigella (ensaios de sonda fluorescente)

Número do produto e especificações de embalagem:

Introdução do produto:Este kit é adequado apenas para a detecção qualitativa de Shigella em alimentos. Outros testes devem ser realizados de acordo com o padrão nacional "GB4789-2012 National Food Safety Standard Food Microbiology Inspection Shigella Inspection".

Princípio de detecção：Com base na tecnologia de PCR em tempo real, primers, sondas fluorescentes e outros reagentes necessários para o gene específico de Shigella são usados, e a amostra a ser testada é adicionada para realizar a reação de amplificação. Durante o processo de amplificação, a sonda fluorescente se liga ao fragmento do gene alvo, que pode ser decomposto pela enzima Taq e produzir um sinal fluorescente. Neste momento, o instrumento de PCR quantitativo fluorescente pode reconhecer o sinal fluorescente e desenhar uma curva de amplificação em tempo real correspondente com base em suas mudanças de intensidade, determinando assim se Shigella é detectada.

Kit de detecção de ácido nucleico Shigella(Método de sonda fluorescente PCR) Componentes do produto:

Condições de armazenamento e prazo de validade:Armazenar a -20°C longe da luz, válido por 12 meses, evitar congelamentos e descongelamentos repetidos.

Sensibilidade:O limite mínimo de detecção chega a 100 UFC/Teste

Outros materiais e instrumentos necessários:Instrumento de PCR quantitativo de fluorescência (com canal de fluorescência capaz de detectar marcadores FAM), centrífuga de alta velocidade, pipetas, pontas de pipeta e tubos de centrífuga, etc.

Kit de detecção de ácido nucleico Shigella(Método de sonda fluorescente PCR) Guia do usuário:

1. Pré-tratamento de amostra

1) Preparação de DNA modelo para caldo de enriquecimento de amostra:
a) Pegue 25 g da amostra a ser testada e coloque em 225 mL de caldo de enriquecimento de Shigella e incubar a 36 ℃±1 ℃ por 10~12 h;
b) Colocar 1 mL da solução de enriquecimento acima em um tubo de centrífuga estéril de 1,5 mL, centrifugar a 6000 r/min por 5 min e remover completamente o sobrenadante;
c) Adicionar 30 μL de tampão de lise para suspender completamente o precipitado no fundo do tubo, bater na parede do tubo para eliminar bolhas e aquecer a 99°C por 10 min;
d) Centrifugue a 12000 r/min por 15 min. O sobrenadante é a amostra de DNA a ser testada. Coloque-a no gelo e centrifugue novamente se não for usada por um longo tempo.

2) Preparação de DNA modelo de colônias suspeitas:Escolha colônias suspeitas e suspenda-as totalmente em um tubo de centrífuga estéril pré-adicionado com 30 μL de tampão de lise e, em seguida, siga as etapas c) e d) acima.

2. Adicione amostra e reaja

1) Pegue n tubos de reação PCR conforme necessário (n = 1 tubo de controle negativo + número de amostras a serem testadas + 1 tubo de controle positivo), retire a pré-mistura do kit, derreta completamente, vórtice e centrifugue brevemente, adicione 20 μL de pré-mistura em cada tubo e reserve.
2) Adicione 5 μL de controle negativo, DNA de amostra e controle positivo aos tubos de reação n acima, respectivamente, para um volume total de reação de 25 μL. Feche bem as tampas dos tubos, centrifugue brevemente e realize imediatamente a reação de amplificação por PCR.
3) O sistema de reação PCR é de 25 μL, e o canal de detecção FAM é usado para coletar o sinal de fluorescência a 60°C no estágio de reação 2. O procedimento específico é o seguinte:

Nota: Colete o sinal de fluorescência a 60°C no estágio de reação 2. Para instrumento de PCR de fluorescência multicanal, selecione fluoresceína "FAM" como canal de coleta de sinal, selecione "Nenhum" para grupo de extinção e selecione "Nenhum" para correção de corante.

3. Resultados:Em geral, os resultados do teste podem ser lidos diretamente através da linha de base e do limite definido automaticamente pelo software. Se forem necessários ajustes, eles poderão ser feitos de acordo com as condições do próprio instrumento (como ruído, etc.) e os diferentes canais fluorescentes selecionados.

1) Controle de qualidade:O controle negativo não mostra uma curva de amplificação do tipo S óbvia ou valor Ct> 35, ​​e o controle positivo mostra uma curva de amplificação do tipo S e seu valor Ct é <30. Se os controles positivos e negativos não atenderem às condições acima ao mesmo tempo, os resultados do teste serão inválidos e deverão ser testados novamente ou entrar em contato com o suporte técnico do produto.

2) Interpretação dos resultados:(Interpretação baseada no valor Ct obtido da reação, veja detalhes na tabela abaixo:)